A petesejtek hibái és azok hatása az in vitro eljárás végeredményére
A petesejtek hibái és azok hatása az in vitro eljárás végeredményére, vagy "Miért nem minden petesejt szül babát?"
A technológia in vitro megtermékenyítés az érett petesejtek megtermékenyítéséből áll (Metaphase II stádium), az embriók megszerzéséből és a beültetések méhüregébe történő visszavezetéséből, amelyek terhességhez vezetnek. A petesejtek minősége közvetlenül befolyásolja a megtermékenyítést és az embriók kompetenciáját további fejlődésükhöz. A tojások minőségét bemutató kritériumok fel vannak osztva: morfológiai, sejtes és molekuláris. A petesejt minőségének morfológiai kritériumait az in vitro megtermékenyítés előtt alkalmazzák, mivel a petesejt minősége a legnagyobb hatással van az ICSI megtermékenyítés eredményeire, a korai fejlődésre és az embrió beültetésére. Ezért a petesejtek minősége meghatározó tényező a megtermékenyítésben, a kiváló minőségű embriók termesztésében és a meddőség kezelésében.
Érdekesség, hogy az embriológiai laboratóriumban alkalmazott két megtermékenyítési módszerben a tojások minőségét eltérően határozzák meg. A hagyományos (klasszikus) in vitro megtermékenyítésben (IVF) a follikuláris szúrás után eltávolított peték morfológiai kiértékelését sztereomikroszkóppal végzik, az egyes tojásokat körülvevő kumuluszsejtek típusa alapján.
ICSI-megtermékenyítés esetén azonban az egyes petesejtek minőségét nagy nagyítású, invertált mikroszkópon határozzák meg, miután a tojást kitették (az összes környező gomoly sejtet és a koronarádium sejteket eltávolították a hyaluronidase enzim segítségével), és kiértékelik a citoplazmát és annak zárványait, a perivitellin teret és magát a pellucid zónát. Ez az értékelés információt nyújt a petesejt fejlődésének stádiumáról [az I. fázis, az I metafázis (MI) vagy a II metafázis (MII) a germinalis vezikulája (GV)] és a minőségről [a citoplazmatikus degeneráció jeleiről, a poláris testről (PB) vagy a pellucid zónáról. ].
Ezt követően az összes MII-petesejt ICSI-megtermékenyítésen megy keresztül, és a keletkező embriók fejlődési potenciálját csak a saját már mofológiájuk alapján jósolják meg, függetlenül attól, hogy a petesejtek milyen minőséget határoztak meg korábban. Az ICSI megtermékenyítés végeredménye az eltávolított peték minőségétől függ.
Az embriók normális megtermékenyülése és korai fejlődése még a hibás és a citoplazma rendellenes morfológiájú petesejtjeiben is megfigyelhető, de az így létrejövő embriók nem ugyanolyan beültetési potenciállal rendelkeznek, mint a normál citoplazmával rendelkező petékből.
4. fotó: Megtermékenyített tojás rossz morfológiájú
A kumulusz sejtek és a koronarádium eltávolítása után a fő morfológiai rendellenességek a rendkívül magas granuláció, a citoplazmatikus zárványok, például vakuolák, a sima endoplazmatikus retikulum klaszterei, a fénytörő és nekrotikus testek.
A normál tojások tiszta citoplazmával rendelkeznek, egyenletes textúrájúak és homogén finom szemcsék.
Asztal. 1 A petesejtek minőségét bemutató kritériumok
Kritérium
Paraméterek
Gomoly-zöldség komplex (COC)
A környező gomoly tömörsége és vastagsága (sűrűsége), a citoplazma fényereje
Granulálás, festés, régiók az organellák csoportjaival
Poláris test (PB)
Alak (kerek vagy ovális), méret (nagy vagy kicsi), felület (sima vagy durva), citoplazma (ép vagy töredezett)
Pellucid zóna (ZP)
Periwinkle space (PVS)
Méret (normál vagy nagyított), szemcsés zárványok jelenléte vagy hiánya
A petesejt meiotikus érése
A petesejtek érése két egymással összefüggő folyamatot foglal magában: a nukleáris és a citoplazmatikus érést.
Stimuláció után a petesejtek újraindítják (újrakezdik) a meiózist. A tojás magja megváltoztatja szerkezetét. A petesejt maghártyája eltűnik. A mikrotubulusok egy bipoláris orsóba vannak rendezve, és az összes kromoszóma a sejt egyenlítőjénél helyezkedik el. Az első meiotikus osztódás a petesejtben folytatódik; megosztás után az első poláris test elválik és bejut a perivitellin térbe. Ezután kezdődik a második meiotikus osztódás, amely a II. Metafázisban áll meg. Ezt a folyamatot a tojás nukleáris érlelésének nevezik.
Annak érdekében, hogy az ICSI után sikeresen megtermékenyítsük a petesejtet, és új organizmus alakulhasson ki, a tojás magjának és citoplazmájának egyszerre kell érettnek lennie. Ha a petesejt citoplazmája éretlen, akkor az embrió nem képes normálisan fejlődni a megtermékenyítés után. A petesejt citoplazmájának érettsége akkor bizonyított, amikor az ICSI után 16-18 órával in vitro megfigyeljük a megtermékenyítést, majd az embrió fejlődését.